Fungi: taxonómia Kmeň Mykophyta

Prezentácia na tému: "Fungi: taxonómia Kmeň Mykophyta"— Prepis prezentácie:

1 Fungi: taxonómia Kmeň Mykophyta Phycomycetes, pravé pliesne, nepriehradkované mycelium trieda Zygomycetes rad Mucorales Eumycetes, pravé huby, delené mycelium trieda: Ascomycetes -vreckaté Basidiomycetes -stopkovýtrusé Deuteromycetes –huby nedokonalé

2 Huby Bežne prítomné v prírode ako saprofyty, prechodne kolonizujú človeka, často prítomné v klinickývc vzorkách, určiť ich úlohu v patogenéze môže byť ťažké Účinky: 1. Mykózy – pravé infekčné ochorenia, vyvolané mikromycétami 2. Mykotoxikózy – chorobné stavy vyvolané metabolickými produktami húb ( ergotamínové alkaloidy, psychotropné látky, aflatoxíny) delia sa na a.) hubové intoxikácie b.) vlastné mykotoxikózy (aflatoxikóza)

3 3. Mykoalergózy- vzdušné spóry, alergická pneumónia (rinitída, bronchiálna astma, aleveolitída atopie) 4. Mycetizmy – mechanické, prítomnosť mycetických elementov kolonizácia a ochorenia - vrodené imunitné mechanizmy, ochorenia krátkodobé, samolimitujúce. U imunonekompromitovaných : povrchové, kožné, podkožné, systémové mykózy U imunokompromitovaných a AIDS: huby s nízkym patogénnym potenciálom - oportunistické mykózy

4 Eukaryontné bunky, jadro, jadrová membrána, delia sa mitoticky Cytoplazma – mitochondrie, organely Plazmatická membrána - lipidy, glykoproteíny, steroly Bunková stena - mnohovrstevná rigídna, chitín., glukany, manany - neobsahuje peptidoglykán Podobnosť so živočíšnymi bb. a odlišnosť od bakteriálnych bb = problémy při terapii Heterotrofny metabolizmus - saprofyty, symbionty, komenzály alebo parazity Náhodné patogény, schopné adaptácie, dimorfizmus - niektoré ( H. capsulatum, B. dermatitis, P. brasiliensis) existujú vo forme kvasinky alebo plesne (často prítomné súčasne). C. albicans len jako kvasinka. Niektoré vytvárajú pseudohyfy - filamentózne, plesňam podobné - psuedohyfy, predĺžené bunky, pospájané - ako safalátky

5 Hýfy – septované,neseptované
Plesne – vláknité, mycéliové huby, zložené z vetvených vláken(hyfy) - predlžujú sa na koncoch a môžu byť mnohojadrové cénocytické alebo septované. Hýfy – septované,neseptované Sústava hýf sa nazýva mycelium. M. vnorené do kultivačného média - vegetatívne, M. vyčnievajúce nad povrch - vzdušné - uvoľňujúce špecializované štruktúry konídiá - asexuálne rozmnožovanie, diseminácia, identifikácia Rozmnožovanie plesní - spóry

6 Kvasinky - jednobunkové, reprodukujú sa asexuálne tvorbou blastokonídií (pučanie) alebo prepolením.
pseudomycélium – retiazky predĺžených buniek Dg. kvasiniek – podľa schopnosti fermentácie cukrov a asimilácie zlúčenín uhlíka a dusíka Dimorfné huby – rastú v mycéliovej alebo v kvasinkovej forme, väčšina ľudských patogénov

7 Zvýšený výskyt mykóz v 20. St.
Lepšia diagnostika Cestovanie- endemické mikromycéty Iatrogénne faktory- ATB, kortikoidy, cytostatiká, imunosupresíva, hormonálna antikoncepcia, diabetes, AIDS Ekologické faktory- narušenie DCD

8 Patogénny potenciál húb
Obvykle exogénne infekcie - s výnimkou kandidózy Neustála expozícia ľudí hubám, ochorenie vzniká pri porušení ochranných bariér kože, slizníc a pri imunodeficite (aj prechodnom) (Mastné kyseliny, pH, epiteliálny povrch, fyziologická mikroflóry kože, transferín)

9 Rozvoj infekcie vyžaduje
1. Adherenciu na sliznice 2. Penetrácia do tkanív, niekedy spojená so zmenou huby (dimorfizmus), metabolizmu 3.množenie v tkanive, prekonanie obranných mech. host. 4. Poškodenie tkaniva ( mechanické) Imunita – základ. obranný mech. = fagocytóza

10 Laboratórna diagnostika mykóz
Primárne patogény - mikroskopia tkanivovej vzorky, kultivácia Oportunistické patogény - často len kontaminant, opakovaná izolácia a prítomnosť dokázaná mikroskopicky vo vzorke * Metódy odberu - sterilne, pred odberom dezinfekcia miesta (koža, nechty, vlasy) 70% etanolom + vysušiť, zoškrab * Spracovanie - časť materiálu +10% KOH (deštrukcia tkaniva, huby obsahujú chitin odolávajúci alklickým činidlám) - mikroskopicky-hyfy. Farbenie podľa Gomoriho, Schiffovo farbenie kultivácia na selektívnych médiách (zábrana rastu kontaminujúcich baktérií) pri 25 a 30 st.C

11 Kultivačné médiá Selektívne
Sabouraudova agar - dextroza, pepton, menej agaru a pH 5,5 - kyslé prostredia a vysoká koncentrácia cukru Saprofytické huby môžu prerásť patogénne - pridáva sa chloramphenicol (proti baktériám) a cycloheximid (proti saprofytickým hubám). C. neoformans tam nerastie Odporúča sa kultivácia na pôde s aj bez ATB při 25 aj 37*C( niektoré - H. capsulatum - nerastú pri 37*) Identifikácia: všetky G+, kvasinky rastú rýchlo, plesne pomaly - mikroskopicky - morfológia

12 Rozdelenie mykóz Povrchové, kožné - povrchová vrstva kože a vlasy,
epidermis, žľazy, Podpovrchové - dermis, podkožné tkanivá, svaly a fascie, neporušená koža a slizničné povrchy slúžia ako bariéry a ohraničujú pôsobenie plesní lokálne Systémové - spôsobené hubami, ktoré sú primárnymi patogénmi pre zdravých jedincov. Majú mechanizmy na preniknutie obranných bariér Oportúnne

13 Povrchové Kozmetické poškodenie, stratum corneum a kutikula vlasov, nevyvolávajú bunkovú im. odpoveď, nespôsobujú reakciu pacienta Vyvolané hubami, ktoré sa množia v koži ale neprenikajú hlbšie Špecifický Ag – trichofytin, prenosné z človeka a zvierat Th:odstránenie húb z kože a vlasov, keratolytické lokálne prípravky (salicylové prípravky), mikonazol - bráni syntéze ergosterolu. hygiena, recidíva

14 Mykózy kožné Koža, vlasy, nechty - obmedzené na keratinizované časti kože a adnex. Vyvolávajú bunkovú im. reakciu, patologické zmeny Klinická manifestácia - tinea - červ - hadovitý alebo prstencovitý vzhľad na koži Špecifický Ag – trichofytin, prenosné z človeka a zvierat Viac ako 100 species - dermatofyty. Rody Trichophyton, Epidermophyton, Microsporum- anthropofilné (chronické úporné infekcie), zoofilné a geofilné dermatofyty (zápalové lézie, dobre odpovedajú na liečbu, spontánne vyhojenie) Niektoré sú endemické, vekovo ohraničené (tinea capitis), zvyklosti v obliekaní Vlasové - Piedraia hortoe (čierna piedra) - priama mikroskopia vlasu Trichosporon beigelii (biela piedra) - priama mikroskopia vlasu, dimorfizmus

15 Malassezia furfur bežne na koži, endogénne inf. Lipofilná Oválne fľaškovité kvasinky Pri infekcii –guľaté bb.a krátke hýfy G+ Dg-priama mikroskopia Th-lokálna- 1% sírnik seleničitý, azoly v kréme

16 Kožné - Malassezia furfur(pityriasis versicolor) - mikroskopicky „spagetovitý vzhľad)

17 Cladosporium (Exophiala) werneckii
-Tinea nigra - pigmentované škvrny rôznej veľkosti - po kontakte z pôdou Dg.- mikroskop- tmavé hýfy kultivácia- šedé kvasinkovité kolónie na SA, neskôr tmavnú, menia sa na mycéliové Th.- keratolytické masti

18 Exophiala wernecki ( tinea nigra) – pigmentované lézie ,dimorfizmus - hnedé kolónie aj hyfy
Zoškraby kože, nechtov, vlasy

19 Postihnutie vlasov Biela piedra – Trichosporon beigelii -mäkké biele uzlíky na vlasovej pošve, v axile Čierna piedra- Piedraia hortae -tuhé čierne uzlíky Th.- oholiť

20 Odber materiálu – miesto odberu očistiť alkoholom
Koža- zoškraby od okrajov lézií Vlasy- pahýle vlasov, vytrhnúť, nie strihané Nechty- dystrofické časti Woodova lampa –fluorescencia postihnutých vlasov Mikroskopia- materiál do KOH, pozorujeme hýfy Kultivácia- Sabouraudov agar, 27-30st.C, 21 dní, vzhľad a farba kolónií Biochemická identifikácia

21 Laboratórna diagnostika dermatofytov
Nález pliesní v klinickom materiále + - konfirmácia kultiváciou Odber a spracovanie s KOH Mikroskopia vetviace sa septované hyfy z kože a nechtov, - spóry vo vnútri alebo obkolesujúce vlasovú pošvu Trichophyton schoenleinii - voskovitá hmota hýf obkolesujúca bázu vlasového folikulu na hranici skalpu - mikroskopia - degenerovné hyfy, stanoví len plesňovú etiológiu, na identifikáciu je potrebná kultivácia. Selektívne medium s ATB a cyclohexamidom při 25* - až 4 týždne. Vyrastené mycélia nie sú diagnostické - nutnosť mikroskopie a identifikácia konídií(makrokonídiá - veľké a mnohobunkové, mikrokonídiá - malé a jednobunkové

22 Podpovrchové Široké spektrum infekcií obvykle po traumatickej inokulácii(tŕň, žihadlo, cudzie teleso) - hlbšie vrstvy, chronický priebeh, šíriaci sa do epidermis. Lokalizácia na nohy, predkolenie, ruky, ramená , zadok. Dif. dg. s aktinomykózami, mycetomom, atypickými mykobakteriózami. Liečba je dprimujúca, chirurgická, radikálna - excízie, amputácie. Vzácne, exotické Sporothrix schencki - lymfokutánna sporotrichóza - aj systémová diseminácia , postihnutie LU –profesionálny charakter

23 Sporothrix schencki - lymfokutánna sporotrichóza - aj systémová diseminácia , postihnutie LU –profesionálny charakter

24 Chromoblastomykóza – Cladosporium carrionii
karfiolovitý vzhľad, rýchlo sa šíriaca. Dg. histologicky Th: kauterizácia, excízia, 5 fluorocytosin p.o.

25 Mycetom - klinická jednotka - spôsobená baktériami (Actinomyces izraelí, Nocardia asteroides, Streptomyces, Actinomadura) alebo pliesňami(Madurella grisea, ), Dg: vyšetrenie hnisavej tekutiny zo sínusov - makroskopické granuly, histologicky, mikroskopicky Th: dôležité stanoviť etiológiu - bakteriálna (ATB) alebo hubovitá, totálna excízia, pri rozsiahlych - amputácia, antimykotiká sú obvykle neúčinné Ostatné subkutánne mykózy - zygomykóza, lobomykóza, rhinosporidióza

26 Eumykotický mycetom - deformujúce napuchnuté lézie s drénujúcimi sínusmi.

27 Dg. - z tkaniva kultivácia pri 37*C pučiace bunky, při 25*C po 3-5 dňoch hviezdicovité kolónie - mikroskopicky vetviace sa hyfy na konci konídiofórov sú konídiá ukladajúce sa do ružíc. Potvrdenie - kultiváciou subkultúry mycélií, pri 37*C vyrastie vo forme kvasinky Th lymfokutánna : KJ p.o., systémová - amphotericin B

28 Sytémové mykózy Primárne patogénne: dimorfné huby - pri 37*C a z tkaniva ako kvasinky - Histoplasma capsulatum, Blastomyces detmatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis a monomofrný Cryptococcus neoformans - schopné napadnúť organizmus a preniknúť cez obranné bariéry C. neoformans - jediný monomorfný - pri 25 aj 37* tvorí kvasinky, tvoriaci mukopolysacharidové púzdro

29 Primárne miesto infekcie - pľúca - väčšinou asymptomatická infekcia.
V prípade sekundárneho šírenia - diseminácia, systémové orgánové postihnutie Obvykle geograficky viazané Odber vzoriek z krvi, CSM a chirurgickej biopsie - rýchlo mikroskopovať a spracovať - vyschnutie, autoytické enzýmy a bakteriálna kontaminácia ich znehodnocuje

30 Histoplazmóza – Histoplasma capsulatum
Sytémové mykózy Histoplazmóza – Histoplasma capsulatum asymptomatické alebo chrípkovité ochorenie, pri veľkej expozícii akútne pulmonálne ochorenie vzácne s komplikáciami - perikarditída, mediastinálna fibróza. Diseminovaná forma u imunokompromitovaných.

31 kultivácia z postihnutých tkanív (sputum, 1-2 týždne,
Dg.histoplazmózy- sérologicky KFR, imunodifúzia (ako antigén sa použije histoplazmín - bezbunkový filtrát z myceliálnej fázy rastu alebo inaktivovaná bunky kvasnicových kolónií), Použitie exoantigénu - antigény sú extrahované z rastového média a reagujú s protilátkami v imunodifúzii histologicky, kultivácia z postihnutých tkanív (sputum, 1-2 týždne, Mikroskopia- premena mycélií na kvasinky v subkultúre - zdĺhavé).. kožný test s histoplazmínom po 2 týždňoch-sporný význam dôkaz Ag z krvi a moču. Th: amfotericin B

32 Blastomykóza –Blastomyces dermatitidis
pľúcne ochorenie často inaparentné, ulcerózne lézie na koži a lytické lézie kostí. Dg. - sérologicky imunodifúziou, kožný test, kultivácia tkaniva a mikroskopické vyšetrenie - pučiace kvasinkovité bunky. Identifikácia premenou myceliálnej fázy na kvasinkovitú. Th - amphotericin B, u nekomplikovaných pľúcnych - ketokonazol

33 Paracoccidioidomykóza –Paracoccidioides brasiliensis
pľúcne ochorenie, vzniká po inhalácii - často asymptomatické, ulcerózna forma v ústach alebo nose, progresívne pľúcne alebo systémové ochorenie. Klinicky zjavné ochorenia viac u mužov. Dimorfná huba - ako plieseň v prírode ako kvasinka v tkanivách. Zmena z plesne na kvasinku in vitro - zmenou teploty z 25-37*C Dg.- sérologicky imunodifúziou, histologicky, kultivačne (10-14 dní pri 25*C - mycelium - premena na kvasinky prenosom do 37*C) a mikroskopicky („lodné kormidlo“ - centrálna veľká bunky a z nej pučia dookola malé guľaté bunky).

34 inhalačné ochorenie asymptomatické až život ohrozujúce, meningitída.
Coccidioidomykóza – Coccidioides immitis inhalačné ochorenie asymptomatické až život ohrozujúce, meningitída. Dimorfná huba - vláknitá plieseň v prírode (cylindrické konídiá). V tkanivách mnohojadrové štruktúry sa menia na jednojadrové endospóry, z ktorých rastú nové sferuly. Endemické oblasti. Dg.-serologicky imunodifúziou, precipitáciou ( skoré štádiá) alebo KFR (neskoré štádiá), kožný test Kultivácia –nebezpečná, len v boxoch!!! Th.- Amfotericin B i.v. (zle preniká do CSM-i.t.). Ketokonazol - zastaví infekciu - relapsy po prerušení liečby.

35

36

37 Kryptokokóza-Cryptococcus neoformans torulóza,európska blastomykóza.
- Neexistuje dimorfizmus. - 4 sérotypy A,D a C,B - virulencia - púzdro asymptomatické pľúcne ochorenie - solitárny pľúcny nodul - imitujúci Ca, - symptomatická pneumónia - difúzne infiltráty, hematogénna diseminácia - meningitída (bolesť hlavy, protrahovaná niekoľkotýždňová teplota) alebo intracerebrálna hmota, kožné lézie, lytické lézie kostí.

38

39 Kryptokokóza Dg.: - detekcia antigénu – polysacharid.púzdra latex aglutinácia (falošne pozit pri reumatoidnom faktore) - Burriho metóda. - Kultivácia - púzdro, ureázová aktivita Odlíšenie patogénnych a nepatogénnych : - rast pri 41*C - patogénne nerastú Th.- amfotericin B, 5 fluorocytozín pri infekcii CNS - 10 tý, kombinácia oboch 6 tý

40 Oportúnne mykózy Obvykle tolerované bez následkov s výnimkou alergickej hypersenzitivity. Vysoký stupeň vrodenej rezistencie proti kolonizácii hubami, nízky stupeň virulencie húb. Pri imunodeficite - život ohrozujúce (AIDS, drogy, ožarovanie, cytotoxické lieky) Najčastejšie - Candida albigans, Aspergillus fumigatus, Rhizopus - bez taxonomickej súvislosti. Patogénne účinky rôzne a rôzneho stupňa.

41 Aspergilóza – Aspergillus fumigatus, A.niger,…
ochorenie z exogénneho zdroja, nie sú súčasťou FMF dôkaz vo vzorke z tkaniva. A. flavus, A. fumigatus- len oportunistické infekcie. Alergická aspergilóza, sekundárna kolonizácia, systémová aspergilóza Lab.dg.: pravidelne septované hyfy orientované rovnakým smerom vo vzorke. Kultivácie často negatívne. Invázne ochorenie - potvrdenie při opakovanom náleze

42

43

44 Zygomykóza (mukormykóza, phycomykóza)
Mucor, Absidia, Rhizopus - bežné v okolí, podobné ochorenia ako aspergilóza. - Tvoria cénocytické hyfy. - Ochorenia majú pôvod v paranazálnych sínusoch a postupujú do orbity so šírením do mozgu. - Terminálne štádium acidotických pacientov s metabolickými problémami (D.M.), - pľúcne, GIT, subkutánne u imunosuprimovaných. - invázne po kolnizácii popálených plôch. - pri diseminácii predilekcia k veľkým cievam - ich embolizácia, ischémia a nekróza priľahlých tkanív. Dg.: filamentózne, cénocytické

45

46

47 Kandidóza - Candida sp. súčasť normálnej fyziologickej flóry(sliznica úst, vagíny, GIT, recta), kolonizácia bez príznakov ochorenia. Zriedkavo prítomné na koži, niekedy v intertrigu. Hemataogénny prístup z orofaryngu alebo GIT pri poškodení sliznice po chemoterapii alebo kontaminovanými katetrami, (obvykle endogénna infekcia) Postihnutie pľúc, sleziny, ľadviny, pečeň, srdce, mozog, oko. Kožné lézie pri diseminácii. HK obvykle negatívne.

48 Lokalizované infekcie kože a nechtov, (dif. dg
Lokalizované infekcie kože a nechtov, (dif.dg. od dermatofytózy) ochorenia slizníc úst, vagíny, oezofagu, brochiálneho stromu Chronická mukokutánna kandidóza Diseminovaná kandidóza Imunita - humorálna a hlavne bunková B bb. Th: lokálne pre kožné a mukokutánne, systémové a nechty -amfotericín B a 5 fluorocytozín, ketokonazol a flukonazol - fungistatické. !Korekcia imunosupresie! Pri intubácii - kontrola a výmena

49

50 Kolónie - veľké kolónie, smotanovej farby
Diagnóza kandidózy Tvoria obvykle blastospóry, pseudohyfy a septované hyfy. C.glabrata - len kvasinky. Kolónie - veľké kolónie, smotanovej farby Kvasinky izolované z HK, CSM a chirurgických materiálov - identifikovať po druh (morfológia, fyziológia, biochémia) z moču, spúta a iných nesterilných oblastí - môžu byť súčasťou FMF alebo prechodnej kolonizácie Rýchly test - C. albicans - germ tubes test - hyfálne výrastky pri inkubácii kvasinky suspendovanej v ľudskom sére pri 37*C 2 hod.

51

52 Candida albicans Candida albicans mikroskopický preparát podľa Grama - G+ elipsoidné útvary rast na ryžovom agare a mikroskopia - blastospóry, pseudohyfy, septované hyfy rast na Sabouraudovom agare - smotanové kolónie dôkaz protilátok imunodifúziou - antigén + protilátky v agare dôkaz pučania v ľudskom sére - germ test

53 Biochemická diferenciácia kandíd
Auxanogram- dif.dg.na základe asimilácie cukrov a dusíkatých látok. Rast kmeňa je stimulovaný okolo disku s príslušným substrátom. Zymogram-dôkaz štiepenia cukrov s tvorbou kyseliny a plynu gl l ga r m s

54 Polyény –lokálne, toxicita - amfotericin B, nystatin
Antimykotiká Polyény –lokálne, toxicita - amfotericin B, nystatin Azolové deriváty - interferencia s enzýmami záviacimi na cytochromoch a pôsobiacimi pri demetylácii lanosterolu na ergosterol - miconazol,ketoconazol, flukonazol, Nukleotidy - inhibícia DNA a RNA syntézy - 5 fluorocytozín

55 Antimykotiká Grisány - inhibícia funkcie mikrotubulov - grizeofulvin
KJ - pravdepodobne aktivácia lyzozomálnych enzýmov Dlhodobé podávanie a monitorovanie pacienta Testovanie citlivosti na antimykotiká - málo štandardizované, nie vždy sú prediktívne pre klinický úspech (predovšetkým pre azoly a 5 fluorocytozín)

56 Ďakujem za pozornosť