Probing the Binding Site of Abl Tyrosine Kinases Using in Situ Click Chemistry Bc. Matúš Hlaváč.

Prezentácia na tému: "Probing the Binding Site of Abl Tyrosine Kinases Using in Situ Click Chemistry Bc. Matúš Hlaváč."— Prepis prezentácie:

1 Probing the Binding Site of Abl Tyrosine Kinases Using in Situ Click Chemistry
Bc. Matúš Hlaváč

2 Abl kináza Abl- gén na chromozóme 9 (proto-onkogén) kódujúci tyrozín kinázu Mutácia v tomto géne je spojená s tvorbou chronickej myeloidnej leukémie (CML). => Abl je aktivovaný translokáciou s BCR The ABL1 proto-oncogene encodes a cytoplasmic and nuclear protein tyrosine kinase that has been implicated in processes of cell differentiation, cell division, cell adhesion, and stress response. Mutations in the ABL1 gene are associated with chronic myelogenous leukemia (CML). In CML, the gene is activated by being translocated within the BCR (breakpoint cluster region) gene on chromosome 22. This new fusion gene, BCR-ABL, encodes an unregulated, cytoplasm-targeted tyrosine kinase that allows the cells to proliferate without being regulated by cytokines. This, in turn, allows the cell to become cancerous. ABL1 kinase domain (blue) in complex with the second-generation Bcr-Abl tyrosine-kinase inhibitor nilotinib (red) This gene is a partner in a fusion gene with the BCR gene in the Philadelphia chromosome, a characteristic abnormality in chronic myelogenous leukemia (CML) and rarely in some other leukemia forms. The BCR-ABL transcript encodes a tyrosine kinase, which activates mediators of the cell cycle regulation system, leading to a clonal myeloproliferative disorder. The BCR-ABL protein can be inhibited by various small molecules. (breakpoint cluster region) génom na chromozóme 22. => nový fúzny gén BCR-ABL (Philadelphia chromozóm) kódujúci neregulovanú tyrozín kinázu, ktorá spôsobuje proliferáciu bez regulovania => vznik rakovinovej bunky

3 Imatinib mesylate FA030 IC50= 0.89 µM pri K-562 bunkovej línií ADME predikcia nepreukazuje výrazný rozdiel medzi Imatinibom 6 vodíkových väzieb s proteínom Triazolový kruh vytvára 2 vodíkové väzby medzi karbonylovými skupinami Asp 381 a His 361

4 In situ click Použitie click reakcie založenej na Huisgenovom princípe
Použitie tubulínu

5 Schopnosť Abl vytvoriť click reakciu za vzniku FA030
- Prítomnosť FA030 detegovaná pomocou ICP TG-MS - Zaznamenaný požadovaný pík FA030 v oboch roztokoch obsahujúcich Abl

6 - roztok azidu 2, 3 a alkínov 4-8 inkubovaný
4 dni pri teplote 37 °C v prítomnosti Abl Zisťovanie prítomnosti produktu pomocou HPLC a HRESI MS

7

8